[an error occurred while processing this directive] Brachiola algerae - Séquençage aléatoire global





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Brachiola algerae
Séquençage aléatoire global

-> Brachiola algerae, un parasite multi-hôtes






La microsporidie Brachiola algerae, dont la taille du génome est estimée à 10 Mb, peut être produite en culture cellulaire. Aussi, en s'appuyant sur l'expérience et la réussite du projet de séquençage du génome complet d'E. cuniculi, une stratégie similaire est proposée:

  • Production des parasites en culture cellulaire sur cellules fibroblastiques humaines (HFF);
  • Purification des formes de résistances (spores);
  • Elimination des contaminants d'ADN des cellules-hôtes par traitement DNAse (la paroi sporale protège l'ADN du parasite);
  • Purification de l'ADN parasitaire (utilisation des propriétés naturelles de dévagination de l'appareil d'invasion permettant le relargage de l'ADN du parasite);
  • Construction de deux banques plasmidiques (inserts 3 et 10 kb respectivement) et d'une banque miniBAC (inserts d'environ 25 kb);
  • Séquençage des clones recombinants (7-8 équivalents génome);
  • Assemblage;
  • Finition (séquençage des régions de mauvaise qualité ou avec une couverture insuffisante ainsi que les régions manquantes);
  • Validation de l'assemblage final par analyse utilisant des endonucléases de restriction sur les ADN miniBAC;
  • Annotation.

Contacts:
Michael Katinka (Genoscope) - Valérie Barbe (Genoscope) - Pierre Peyret





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