Le Genoscope contribue à l'étude des séquences exprimées chez le
chaetognathe Spadella cephaloptera. Il a produit une collection
d'EST à partir d'une banque d'ADNc de cet animal, établie par le
Centre d'océanographie de Marseille (titre: 5,5 x 106
pfu/ml). Les ARN messagers utilisés pour construire cette banque ont
été purifiés à partir différents stades embryonnaires de Spadella
cephaloptera (entre 0 et 48 heures après l'éclosion). Les ADNc ont
été clonés dans le vecteur Lambda-triplex 2 ; ils sont compris entre
500 pb et 5 kb, avec une taille moyenne d'environ 1 kb. En vue du
séquençage, la banque ADNc primaire a été excisée (infection de la
souche bactérienne BM25.8, qui exprime la recombinase CRE et permet la
circularisation du phagemide en plasmide). Les inserts supérieurs à
800 pb ont été sélectionnés.
Le Genoscope a séquencé 11 000 clones de cette banque en 5'. Les séquences ont subi un premier traitement pour valider
leur qualité et éliminer les séquences vecteur, les contaminants et
les artefacts de clonage éventuels. L'annotation a eu lieu au centre
d'océanographie de Marseille. Après élimination des séquences
correspondant aux ARNr 12S et 16S, les séquences restantes ont été
blastées contre les bases de données protéiques Swissprot (2 136
clones identifiés) et NR (2 384 clones identifiés). L'annotation
a été menée en priorité à partir de Swissprot, puis à partir de NR en
cas d'absence d'homologie dans Swissprot. Ainsi, une relation
d'homologie a pu être assignée à 2 396 clones qui correspondent
aux transcrits de 792 gènes différents. Cette annotation a été
réalisée sans passer par une étape de clustering car le haut degré de
polymorphisme au sein de la banque rendait délicate la distinction
entre orthologues polymorphes et paralogues au sein des
clusters. Cependant, des tests de clustering valident les résultats
précédents.